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產(chǎn)品名稱 | 原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞；293Ad5 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63620 |
細(xì)胞名稱 人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞；293Ad5
形態(tài)特性: 上皮樣；多角
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 293細(xì)胞是由腺病毒5型（Ad5）DNA轉(zhuǎn)化原代人胚腎獲得的細(xì)胞系。該細(xì)胞對人的腺病毒尤其敏感，能受納高水平的腺病毒DNA。含有5型腺病毒的基因，且能高效表達(dá)。此外，293細(xì)胞的染色體數(shù)目以亞三倍體（hypotriploid）占多數(shù)，主流數(shù)為64條（30%），高倍體為4.2%。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C35
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞；MMHRL1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Sagittula stellata Gonzalez et al.細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1G9 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1C1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1B6 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Phoma glomerata (Corda) Wollenweber et Hoch ..細(xì)胞名稱: 兔正常食管上皮細(xì)胞；RNLEC/HL-030RabbitNormalEsophagealEpithelialCellsRNEEC/HL-030 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Homo sapiens, human skin細(xì)胞名稱: 人肺腺癌細(xì)胞系；ZLC-001 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Gibberella fujikuroi var.moniliformis (W ..細(xì)胞名稱: 人食管鱗癌細(xì)胞系；ZEC-134 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Homo sapiens, human細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；XA272-919 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
freeze-dried細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；XA272-907 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Gaertneriomyces semiglobiferus Uebelmesser ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；XA272-917 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；XA272-918 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Acanthamoeba polyphaga (Puschkarew) Page細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；XA272-915 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Pectobacterium cypripedii (Hori) Brenner et ..細(xì)胞名稱: MAL基因敲除鼠舌鱗癌細(xì)胞系；Mca-T-MAL MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mus musculus, mouse細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；XA272-908 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Homo sapiens, human細(xì)胞名稱: 人內(nèi)膜癌細(xì)胞系；ZJB-ENC1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
freeze-dried細(xì)胞名稱: 人胰腺癌細(xì)胞系；BxPC-3M8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞；293Ad5人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒β-EPRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒β-EPRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒βGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒βGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)ELISA試劑盒βGDELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA試劑盒βGDELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒β-glucosidaseELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒β-HCGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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